Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)Hernández, Jonathan [asesor]Alves-Rosa, María Fernanda [directora]Zhuo L., Wendy M. [autora]2026-05-192026-05-192026https://repositorio.ulatina.edu.pa/handle/001/709Esta investigación tuvo como objetivo estandarizar y comparar métodos de aislamiento y condiciones de cultivo de células madre mesenquimales humanas (hMSC) derivadas de cordón umbilical, con el fin de optimizar su obtención y expansión in vitro para aplicaciones en biotecnología y medicina regenerativa. Las hMSC representan una población celular de alto valor terapéutico debido a su capacidad de autorrenovación, diferenciación multipotente e importante actividad inmunomoduladora y paracrina. El estudio se desarrolló bajo un diseño experimental comparativo, evaluando dos métodos de aislamiento: digestión enzimática con colagenasa NB4 y un kit comercial estandarizado para disociación de tejido de cordón umbilical. Asimismo, se analizaron dos condiciones de suplementación del medio de cultivo: suero fetal bovino (SFB) y lisado de plaquetas humano (hPL), con el propósito de determinar su influencia en la adherencia, morfología, proliferación y viabilidad celular. Los cordones umbilicales fueron obtenidos bajo criterios éticos establecidos, sometidos a tamizaje serológico y molecular para descartar enfermedades infectocontagiosas, y procesados en un laboratorio con condiciones controladas de bioseguridad. El procedimiento experimental incluyó recepción, preparación del tejido, fragmentación mecánica, digestión enzimática o disociación mediante kit comercial, filtración, centrifugación y establecimiento del cultivo primario. Las células obtenidas mostraron capacidad de adherencia al plástico y morfología fibroblasto de característica de las hMSC. Se observó que ambos métodos permitieron la obtención de poblaciones celulares viables; sin embargo, el rendimiento inicial y la dinámica de expansión variaron según el método de aislamiento y el suplemento utilizado. El hPL evidenció un comportamiento favorable en la expansión celular, representando una alternativa potencialmente más segura frente al SFB en el contexto de futuras aplicaciones clínicas. En conclusión, la estandarización de protocolos de aislamiento y cultivo es fundamental para garantizar reproducibilidad, calidad biológica y proyección traslacional de las hMSC derivadas de cordón umbilical, fortaleciendo las bases técnicas para su desarrollo en terapias celulares avanzadas.This study aimed to standardize and compare isolation methods and culture conditions for human mesenchymal stem cells (hMSCs) derived from umbilical cord tissue, in order to optimize their procurement and in vitro expansion for applications in biotechnology and regenerative medicine. hMSCs represent a cell population of high therapeutic value due to their self-renewal capacity, multipotent differentiation potential, and significant immunomodulatory and paracrine activity. The research was conducted under a comparative experimental design, evaluating two isolation methods: enzymatic digestion using NB4 collagenase and a standardized commercial kit for umbilical cord tissue dissociation. Additionally, two culture medium supplementation conditions were analyzed: fetal bovine serum (FBS) and human platelet lysate (hPL), with the aim of determining their influence on cell adherence, morphology, proliferation, and viability. Umbilical cords were obtained following established ethical criteria, subjected to serological and molecular screening to exclude infectious diseases, and processed in a laboratory under controlled biosafety conditions. The experimental procedure included tissue reception, preparation, mechanical fragmentation, enzymatic digestion or commercial kit -based dissociation, filtration, centrifugation, and establishment of primary culture. The isolated cells demonstrated plastic adherence and a fibroblast-like morphology characteristic of hMSCs. Both methods enabled the successful generation of viable cell populations; however, initial yield and expansion kinetics varied depending on the isolation method and culture supplement used. hPL showed favorable performance in promoting cellular expansion, representing a potentially safer alternative to FBS in the context of future clinical applications.In conclusion, the standardization of isolation and culture protocols is essential to ensure reproducibility, biological quality, and translational potential of umbilical cord–derived hMSCs, thereby strengthening the technical foundation for their development in advanced cellular therapies.Capítulo 1: Introducción.Capítulo 2: Marco Teórico.Capítulo 3: Marco Metodológico.Capítulo 4: Resultados.Capítulo 5: Discusión.Conclusiones.Recomendaciones.Anexos.Referencias Bibliográficas.72 p.application/pdfimage/jpegspaTrabajo de grado - Maestríainfo:eu-repo/semantics/openAccessCiencias de la SaludLicenciatura en BiotecnologíaCordón UmbilicalCultivo de Células HumanasTécnicas de Laboratorio ClínicoAnálisis BiológicoCultivo in VitroCélulas MadreTesis y Disertaciones AcadémicasCélulas Madre Mesenquimales HumanasCordón UmbilicalGelatina de WhartonAislamiento CelularDigestión EnzimáticaColagenasa NB4Lisado de Plaquetas HumanoSuero Fetal BovinoCultivo CelularEstandarización de ProtocolosMedicina RegenerativaExpansión in VitroHuman Mesenchymal Stem CellsUmbilical CordWharton’s JellyCell IsolationEnzymatic DigestionNB4 CollagenaseHuman Platelet LysateFetal Bovine SerumCell CultureProtocol StandardizationRegenerative MedicineIn Vitro Expansionhttp://purl.org/coar/access_right/c_abf2