Licenciatura en Biotecnología
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Examinando Licenciatura en Biotecnología por Autor "Alves-Rosa, María Fernanda [directora]"
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Ítem Acceso abierto Clonación, sobreexpresión y purificación de la Cruzipaína Cepa Y(Universidad Latina de Panamá, 2026) Bonner, Leighanne [autora]; Alves-Rosa, María Fernanda [directora]La enfermedad de Chagas, causada por el protozoo Trypanosoma cruzi, continúa representando un importante problema de salud pública debido a la persistencia del parásito en el hospedador y a las limitaciones de las estrategias terapéuticas disponibles. La cruzipaína, principal cisteín-proteasa de T. cruzi, participa en procesos esenciales para la supervivencia, diferenciación, invasión celular y evasión de la respuesta inmune del parásito, convirtiéndose en una molécula de gran interés para estudios funcionales, inmunológicos y terapéuticos. La obtención de la cruzipaína recombinante constituye una herramienta fundamental para la generación de anticuerpos y el desarrollo de métodos de caracterización de esta proteína. En este trabajo se realizó la clonación, sobreexpresión y purificación de la cruzipaína de T.cruzi cepa Y, utilizando un sistema de expresión heterólogo basado en Escherichia coli Rosetta (DE3). El gen TcCruzipain fue amplificado mediante PCR de alta fidelidad y clonado en el vector de expresión pGEX-6P-1 Stu2, generando un constructo de fusión con la proteína glutatión S-transferasa (GST). Los clones recombinantes obtenidos fueron evaluados mediante análisis molecular, incluyendo PCR, digestión enzimática y secuenciación Nanopore, confirmándose la presencia del inserto y la identidad del constructo seleccionado. La expresión de la proteína recombinante GST-Czp fue evaluada bajo diferentes condiciones de inducción, seleccionándose condiciones optimizadas para la producción de la proteína en E. coli Rosetta (DE3). La proteína obtenida presentó el peso molecular esperado para la proteína de fusión y se localizó predominantemente en la fracción insoluble. En consecuencia, se implementó un protocolo de solubilización seguido de purificación mediante cromatografía de afinidad con resina Glutathione Sepharose 4B. Finalmente, la identidad de la proteína purificada fue confirmada mediante análisis inmunológico utilizando anticuerpos anti-GST. Los resultados obtenidos permitieron establecer una estrategia reproducible para la producción y purificación de la cruzipaína recombinante, generando una fuente confiable de antígeno para futuros estudios inmunológicos y funcionales. Esta plataforma constituye una herramienta de utilidad para la caracterización de la cruzipaína y aporta una base experimental para el desarrollo de nuevas aproximaciones diagnósticas, inmunológicas y terapéuticas dirigidas contra T. cruzi.Ítem Acceso abierto Comparación de métodos enzimáticos y comerciales para el aislamiento y expansión de células madres mesenquimales humanas derivadas de cordón umbilical, con potencial terapéutico(Universidad Latina de Panamá, 2026) Zhuo L., Wendy M. [autora]; Hernández, Jonathan [asesor]; Alves-Rosa, María Fernanda [directora]Esta investigación tuvo como objetivo estandarizar y comparar métodos de aislamiento y condiciones de cultivo de células madre mesenquimales humanas (hMSC) derivadas de cordón umbilical, con el fin de optimizar su obtención y expansión in vitro para aplicaciones en biotecnología y medicina regenerativa. Las hMSC representan una población celular de alto valor terapéutico debido a su capacidad de autorrenovación, diferenciación multipotente e importante actividad inmunomoduladora y paracrina. El estudio se desarrolló bajo un diseño experimental comparativo, evaluando dos métodos de aislamiento: digestión enzimática con colagenasa NB4 y un kit comercial estandarizado para disociación de tejido de cordón umbilical. Asimismo, se analizaron dos condiciones de suplementación del medio de cultivo: suero fetal bovino (SFB) y lisado de plaquetas humano (hPL), con el propósito de determinar su influencia en la adherencia, morfología, proliferación y viabilidad celular. Los cordones umbilicales fueron obtenidos bajo criterios éticos establecidos, sometidos a tamizaje serológico y molecular para descartar enfermedades infectocontagiosas, y procesados en un laboratorio con condiciones controladas de bioseguridad. El procedimiento experimental incluyó recepción, preparación del tejido, fragmentación mecánica, digestión enzimática o disociación mediante kit comercial, filtración, centrifugación y establecimiento del cultivo primario. Las células obtenidas mostraron capacidad de adherencia al plástico y morfología fibroblasto de característica de las hMSC. Se observó que ambos métodos permitieron la obtención de poblaciones celulares viables; sin embargo, el rendimiento inicial y la dinámica de expansión variaron según el método de aislamiento y el suplemento utilizado. El hPL evidenció un comportamiento favorable en la expansión celular, representando una alternativa potencialmente más segura frente al SFB en el contexto de futuras aplicaciones clínicas. En conclusión, la estandarización de protocolos de aislamiento y cultivo es fundamental para garantizar reproducibilidad, calidad biológica y proyección traslacional de las hMSC derivadas de cordón umbilical, fortaleciendo las bases técnicas para su desarrollo en terapias celulares avanzadas.