Examinando por Materia "Inmunidad Celular"

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    Caracterización de la respuesta inmune celular frente al virus del Dengue (DENV- 2 y DENV-4), mediante citometría de flujo espectral en co-cultivos autólogos de monocitos-linfocitos
    (Universidad Latina de Panamá, 2026) Sánchez, Natasha [autora]; Perea, Mauricio [asesor]; Beltrán, Davis [asesor externo]; Corrales, Rita [asesora externa]
    El dengue es una arbovirosis con un alto impacto en la salud pública, causada por cuatro serotipos que están genéticamente relacionados, pero antigénicamente distintos (DENV-1 a DENV-4) y es transmitidos por mosquitos del género Aedes. En Panamá, la reintroducción del serotipo DENV-4 en 2023 tras 20 años sin circulación, junto a la co-circulación de DENV-1, DENV-2 y DENV-3, configuró un escenario complejo. Este fenómeno de hiperendemicidad aumenta el riesgo de infecciones secundarias y del fenómeno de potenciación dependiente de anticuerpos (ADE). Unas de las problemáticas actuales es la ausencia de modelos animales adecuados y tratamientos antivirales específicos, los modelos in vitro con células inmunes humanas primarias son herramientas esenciales para comprender la inmunopatogénesis viral. En este contexto, este estudio busco caracterizar la respuesta inmune celular frente a DENV-2 y DENV-4 mediante citometría de flujo espectral en co-cultivos autólogos de monocitos-linfocitos de 7 donantes sanos. Ambos serotipos fueron producidos en células Vero y titulados en células BHK por ensayo de placas; los monocitos CD14⁺ fueron aislados por selección magnética positiva a partir de PBMCs, infectados in vitro a MOI 0.5 y co-cultivados en proporción 1:2 con sus linfocitos autólogos. Se diseñó y estandarizó un panel multiparamétrico de 22 marcadores de superficie e intracelulares adquirido en el citómetro Cytek Northern Lights®. La estandarización del panel fue una etapa crítica: se titularon individualmente los anticuerpos utilizando el Stain Index como criterio de selección, evaluados en FlowJo™ v10.10.1. La evaluación computacional en Cytek Cloud arrojó un Stain Index global de 16.19, garantizando adecuada separación espectral. Este proceso permitió identificar y excluir. interferencias irresolubles como las del HLA-ABC/Streptavidin PerCP-eFluor 710, demostrando que el diseño computacional no sustituye la validación experimental. Se analizaron marcadores de activación, citotoxicidad y reconocimiento inmunológico: Nectin-2, DNAM-1, perforina, LAMP-1, TNF-α y NS3 en monocitos, linfocitos T CD4⁺, CD8⁺ y células NK. Aunque no se alcanzó significancia estadística, se observaron tendencias biológicamente plausibles. Este trabajo aporta un protocolo estandarizado de citometría espectral para el estudio de la inmunopatogénesis del dengue y sienta las bases para la identificación de biomarcadores con potencial diagnóstico y pronóstico.